poliakrilamid jel elektroforez ne demek?

Poliakrilamid Jel Elektroforezi (PAGE)

Poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE), biyokimya ve moleküler biyolojide proteinleri ve nükleik asitleri boyutlarına, yüklerine ve şekillerine göre ayırmak için kullanılan bir tekniktir. Bu yöntem, bir elektrik alan uygulandığında, moleküllerin poliakrilamid jel içindeki gözeneklerden geçerek hareket etmesi prensibine dayanır.

Temel Bileşenler ve İşleyiş:

1. Jel Hazırlama: Poliakrilamid jeller, akrilamid ve bis-akrilamid monomerlerinin polimerizasyonu ile oluşturulur. Jeldeki gözenek boyutu, akrilamid konsantrasyonu ayarlanarak kontrol edilebilir. Daha yüksek konsantrasyonlar daha küçük gözenekler oluşturur ve daha küçük moleküllerin ayrılmasını sağlar. Akrilamid

2. Örnek Hazırlığı: Protein veya nükleik asit örnekleri, genellikle denatüre edici bir solüsyon (örneğin, SDS veya üre) ile karıştırılır ve ısıtılarak yapılarının açılması sağlanır. Bu işlem, moleküllerin sadece boyutlarına göre ayrılmasını kolaylaştırır. Denatürasyon

3. Elektroforez: Hazırlanan örnekler jel üzerindeki kuyucuklara yüklenir ve jel, bir elektroforez tankına yerleştirilir. Bir elektrik alan uygulandığında, yüklü moleküller jel içinde hareket etmeye başlar. Negatif yüklü moleküller pozitif elektroda, pozitif yüklü moleküller ise negatif elektroda doğru hareket eder. Elektroforez

4. Ayrılma: Moleküllerin jel içindeki hareket hızı, boyutlarına ve yüklerine bağlıdır. Daha küçük moleküller, daha büyük moleküllere göre jel içindeki gözeneklerden daha hızlı geçerek daha uzağa hareket ederler.

5. Görselleştirme: Elektroforez tamamlandıktan sonra, ayrılan moleküller çeşitli yöntemlerle görselleştirilir. Proteinler için Coomassie mavisi veya gümüş boyama yaygın olarak kullanılırken, nükleik asitler için etidyum bromür gibi floresan boyalar kullanılabilir. Etidyum%20Bromür

PAGE Türleri:

• Doğal PAGE (Native PAGE): Proteinlerin doğal (katlanmış) hallerinde ayrılmasını sağlar. Proteinlerin aktivitesi veya oligomerik yapısı hakkında bilgi edinmek için kullanılır.
• SDS-PAGE: Sodyum dodesil sülfat (SDS) adı verilen bir deterjanın kullanıldığı bir yöntemdir. SDS, proteinleri denatüre eder ve üzerlerine negatif bir yük yükler. Bu sayede proteinler, sadece boyutlarına göre ayrılırlar. Sodyum%20Dodesil%20Sülfat (SDS)
• İzolelektrik Odaklama (IEF) / 2D-PAGE: Proteinleri önce izoelektrik noktalarına (pI) göre ayırır (IEF) ve ardından SDS-PAGE ile boyutlarına göre ayırır. Bu, çok sayıda proteinin yüksek çözünürlükte ayrılmasını sağlar. İzoelektrik%20Nokta

Kullanım Alanları:

• Protein saflığını kontrol etme
• Proteinlerin moleküler ağırlığını belirleme
• Enzim aktivitesini inceleme
• Protein-protein etkileşimlerini araştırma
• Nükleik asitleri ayırma ve analiz etme